A micropropagação é uma técnica que consiste no cultivo in vitro de órgãos, tecidos ou células vegetais em ambiente asséptico. A fase de estabelecimento in vitro é a mais crítica da micropropagação, verificando maiores taxas de contaminação por fitopatógenos, oxidação fenólica e recalcitrância por explantes. O estabelecimento in vitro foi realizado em delineamento experimental inteiramente casualizado com quatro repetições, no esquema fatorial 4 x 2, sendo estudado o efeito de quatros concentrações de ágar bacteriológico (0; 3; 6 e 12 g.L-1) e de dois híbridos de eucalipto. O meio de cultura utilizado foi o MS. Aos 30 dias após instalação do experimento, registraram-se a presença de folhas, pecíolo, broto, calo, oxidação do meio, oxidação do explante e as incidências de Fusarium sp., Aspergillus sp. e bactérias. Os dados foram submetidos àsanálises de variância e de regressão linear quadrática, ambos a 5,0% de significância. O hibrido 1 (Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus) apresentou melhor desempenho sobre o híbrido 2 (Eucalyptus urophylla x Eucalyptus grandis) em relação a porcentagem de folhas e pecíolos. Para as concentrações de ágar as variáveis de ocorrência de folhas, pecíolo, broto, calo e a presença do fungo Fusarium sp. foram significativas. A melhor concentração empregando um método direto de regeneração se encontra no intervalo entre 7,25 e 7,94 g. L-1 de ágar.