Os bambus apresentam um elevado potencial de utilização. Contudo, no Brasil o seu uso é limitado pela escassez de informações sobre aspectos agronômicos, tecnologias de transformação industrial, falta de tradição no emprego desse material e sobretudo pela dificuldade de produção de mudas em larga escala. A micropropagação apresenta-se como uma alternativa a multiplicação de espécies que apresentam limitação de propagação por métodos convencionais, sendo uma técnica que pode viabilizar o plantio de bambu em grandes áreas por fornecer mudas de alto padrão fitossanitário em quantidade e homogeneidade desejáveis. O presente trabalho teve como objetivo, avaliar a influência da concentração de sacarose e do comprimento do explante sobre o estabelecimento in vitro da espécie Dendrocalamus asper. O experimento foi conduzido em delineamento experimental inteiramente ao acaso (DIC) com arranjo fatorial (2 x 5), sendo testados o efeito de dois comprimentos de explantes (15 e 30 mm) e cinco concentrações de sacarose (0, 15, 30, 45 e 60 g L-1). O cultivo in vitro deu-se por 21 dias, ao final dos quais se avaliou a porcentagem de sobrevivência, contaminações visíveis causadas por fungos e/ou bactérias, o número de brotos emitidos por tratamento e a oxidação. Os dados foram transformados em √𝑥 + 1, em seguida foram submetidos à análise de variância (ANOVA) para verificar se houve diferença estatística entre os tratamentos. Os que apresentaram diferença significativa foram comparados pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A interação entre os fatores foi significativa (P<0,05) para a média de brotos e não significativa para porcentagem de sobrevivência e contaminação. A oxidação não interferiu no desenvolvimento dos explantes. A menor contaminação e maior sobrevivência foi observada no tratamento com explantes de 15 mm na ausência de sacarose. O maior número de brotos foi obtido no tratamento com explante de 30 mm na ausência de sacarose.